Contaminarea culturilor celulare poate deveni cu ușurință cea mai frecventă problemă în laboratoarele de culturi celulare, provocând uneori consecințe foarte grave.Contaminanții culturii celulare pot fi împărțiți în două categorii, contaminanți chimici, cum ar fi impuritățile de mediu, ser și apă, endotoxine, plastifianți și detergenți și contaminanți biologici, cum ar fi bacterii, mucegaiuri, drojdii, viruși, infecții încrucișate cu micoplasme.Contaminat de alte linii celulare.Deși este imposibil să se elimine complet contaminarea, frecvența și severitatea ei pot fi reduse prin înțelegerea temeinică a sursei și urmând tehnici aseptice bune.
1. Această secțiune prezintă principalele tipuri de contaminare biologică:
Contaminare bacteriană
Contaminarea cu mucegai și virus
Contaminarea cu micoplasmă
Contaminarea cu drojdie
1.1 Contaminarea bacteriană
Bacteriile sunt un grup mare de microorganisme unicelulare omniprezente.De obicei, au doar câțiva microni în diametru și pot avea o varietate de forme, de la sfere la tije și spirale.Datorită ubicuității, dimensiunii și vitezei rapide de creștere, bacteriile, împreună cu drojdiile și mucegaiurile, sunt cei mai frecventi contaminanți biologici în cultura celulară.
1.1.1 Detectarea contaminarii bacteriene
Contaminarea bacteriană este ușor de detectat prin inspecția vizuală a culturii în câteva zile de la infectarea acesteia;
Culturile infectate apar de obicei tulburi (adică tulburi), uneori cu o peliculă subțire la suprafață.
Scăderi bruște ale pH-ului mediului de cultură sunt, de asemenea, frecvent întâlnite.
La un microscop de putere redusă, bacteriile apar ca niște granule minuscule, în mișcare între celule, iar observarea la un microscop de mare putere poate rezolva formele bacteriilor individuale.
1.2 Contaminarea cu mucegai și virus
1.2.1 Contaminarea cu mucegai
Mucegaiurile sunt microorganisme eucariote din regnul fungic care cresc sub formă de filamente multicelulare numite hife.Rețelele conjunctive ale acestor filamente multicelulare conțin nuclee genetic identice numite colonii sau miceliu.
Similar cu contaminarea cu drojdie, pH-ul culturii rămâne stabil în timpul fazei inițiale de contaminare și apoi crește rapid pe măsură ce cultura devine mai grav infectată și devine tulbure.La microscop, miceliul este de obicei filamentos, uneori sub formă de grupuri dense de spori.Sporii multor mucegaiuri pot supraviețui în medii extrem de dure și inospitaliere în timpul fazei lor de repaus și sunt activați numai atunci când sunt întâlnite condițiile de creștere potrivite.
1.2.2 Contaminarea cu virus
Virușii sunt agenți infecțioși microscopici care preiau mașinile celulei gazdă pentru reproducere.Dimensiunea lor extrem de mică le face dificil de detectat în cultură și de îndepărtat din reactivii utilizați în laboratoarele de cultură celulară.Deoarece majoritatea virusurilor au cerințe foarte stricte pentru gazdele lor, de obicei nu afectează negativ culturile de celule ale altor specii decât gazda.
Cu toate acestea, utilizarea culturilor de celule infectate cu virus poate prezenta un risc serios pentru sănătatea personalului de laborator, mai ales dacă celulele umane sau de primate sunt cultivate în laborator.
Infecția virală în culturile celulare poate fi detectată prin microscopie electronică, imunocolorare cu un set de anticorpi, ELISA sau PCR cu primeri virali corespunzători.
1.3 Contaminarea cu micoplasmă
Micoplasmele sunt bacterii simple, fără pereți celulari, și se crede că sunt cele mai mici organisme autoreplicabile.Datorită dimensiunilor lor extrem de mici (de obicei mai mici de 1 micron), micoplasmele sunt greu de detectat până când ajung la densități extrem de mari și provoacă deteriorarea culturilor celulare;Până atunci, de obicei nu există niciun semn evident de infecție.
1.3.1 Detectarea contaminării cu micoplasmă
Unele micoplasme cu creștere lentă pot persista în culturi fără a provoca moartea celulelor, dar ele modifică comportamentul și metabolismul celulelor gazdă din culturi.
Infecția cronică cu micoplasmă poate fi caracterizată prin rată redusă de proliferare celulară, densitate scăzută de saturație și aglutinare în cultura suspensiei.
Cu toate acestea, singura modalitate fiabilă de a detecta contaminarea cu micoplasmă este testarea regulată a culturii utilizând colorare fluorescentă (de exemplu, Hoechst 33258), ELISA, PCR, imunocolorare, autoradiografie sau testare microbiană.
1.4 Contaminarea cu drojdie
Drojdiile sunt eucariote unicelulare din regnul fungic, cu dimensiuni variind de la câțiva microni (de obicei) până la 40 de microni (rar).
1.4.1Detecția contaminării cu drojdie
Ca și în cazul contaminării bacteriene, culturile contaminate cu drojdie pot deveni tulburi, mai ales dacă contaminarea este într-un stadiu avansat.pH-ul culturilor contaminate cu drojdie se modifică foarte puțin până când contaminarea devine mai severă, stadiu în care pH-ul crește de obicei.La microscop, drojdia apare ca particule individuale ovoide sau sferice și poate produce particule mai mici.
2.Infecție încrucișată
Deși nu este la fel de comună ca contaminarea microbiană, contaminarea încrucișată extinsă a multor linii celulare cu HeLa și alte linii celulare cu creștere rapidă este o problemă clar definită, cu consecințe grave.Obțineți linii celulare de la bănci de celule reputate, verificați în mod regulat caracteristicile liniilor celulare și utilizați tehnici aseptice bune.Aceste practici vă vor ajuta să evitați contaminarea încrucișată.Amprentarea ADN-ului, cariotiparea și izotiparea pot confirma dacă există contaminare încrucișată în cultura dumneavoastră de celule.
Deși nu este la fel de comună ca contaminarea microbiană, contaminarea încrucișată extinsă a multor linii celulare cu HeLa și alte linii celulare cu creștere rapidă este o problemă clar definită, cu consecințe grave.Obțineți linii celulare de la bănci de celule reputate, verificați în mod regulat caracteristicile liniilor celulare și utilizați tehnici aseptice bune.Aceste practici vă vor ajuta să evitați contaminarea încrucișată.Amprentarea ADN-ului, cariotiparea și izotiparea pot confirma dacă există contaminare încrucișată în cultura dumneavoastră de celule.
Ora postării: 01-feb-2023